緩沖液是一種能在加入少量酸或堿和水時(shí)大大減低ph變動(dòng)的溶液.ph緩沖系統(tǒng)對(duì)維持生物的正常ph值和正常生理環(huán)境起到重要作用.多數(shù)細(xì)胞僅能在很窄的ph范圍內(nèi)進(jìn)行活動(dòng),而且需要有緩沖體系來(lái)抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的ph變化.在生物體中有三種主要的ph緩沖體系,它們是蛋白質(zhì)緩沖系統(tǒng)、重碳酸鹽緩沖系統(tǒng)以及磷酸鹽緩沖系統(tǒng).每種緩沖體系所占的分量在各類細(xì)胞和器官中是不同的。
緩沖液根據(jù)用途，一種是單純的hepes+naoh，另一種是hepes+鹽。各種配制方法總結(jié)如下：
一、500ml 1 m hepes, ph = 7.0 stock solution的配制
119.15 g hepes 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1m 的naoh水溶液調(diào)節(jié)至少所需ph(hepes的有效ph 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。
二、加少量鹽的hepes buffer配方(500ml)
hepes 6.5g、nacl 8.0g、na2hpo4.7h2o 0.198g、用0.5m naoh 水溶液調(diào)節(jié)ph值，較后定容。
三、2×hepes緩沖鹽溶液的配制
將1.6g nacl、0.074g kcl、0.027g na2hpo4.2h2o、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g hepes溶解在90ml的蒸餾水，用0.5m naoh調(diào)節(jié)至所需ph值，再用蒸餾水定容至100ml即可。
hepes使用方法有兩種：
(1)hepes可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克hepes，待溶后用ln naoh 調(diào)ph至7.2，濾過除菌后使用。此時(shí)hepes的使用濃度為10 mmol/l。
(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/l)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，較終應(yīng)用濃度仍為10mmol/l。l mol/l(100 x)hepes貯存液配制方法：取23.8g hepes溶于90ml雙蒸水中，用ln naoh調(diào)ph至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
需要注意的是，hepes緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/l，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/l的hepes即可達(dá)到緩沖能力。