在使用傳統(tǒng)高保真酶進(jìn)行pcr時，難免會遇到一些棘手的問題。例如保真度不夠，擴增得到的片段測序后發(fā)現(xiàn)仍有目的堿基發(fā)生突變或缺失。擴增的時間也相對漫長，有時擴增5kb的片段也要花費將近2個小時的時間。現(xiàn)小翌推出一款快速高保真pcr以解決您的煩惱！
2× hieff canace® advancefast pcr master mix (with dye) 預(yù)混液中含有預(yù)先添加的電泳指示劑，pcr產(chǎn)物可直接進(jìn)行電泳，擴增產(chǎn)物為平末端。該產(chǎn)品具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，反應(yīng)體系中只需加入引物和模板即可。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品名稱2× hieff canace® advancefast pcr master mix (with dye)
產(chǎn)品特點超高保真：低錯配率，高gc易突變序列中堿基錯配比231/300000；
擴增速度快：延伸速度快至5 sec/kb；
適用性廣：可覆蓋20-80%gc含量的基因，耐受小鼠裂解物和20%的血液；
穩(wěn)定性好：37℃下存放7d，不影響產(chǎn)品性能；
快速簡便：只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴增，帶有上樣染料，可直接電泳；
產(chǎn)品性能展示01保真度高，錯配率低
以不同物種基因組為模板，選取6段gc rich、極易發(fā)生堿基突變/丟失的片段進(jìn)行擴增，將各自pcr產(chǎn)物克隆至載體，并對每種序列挑取100個單克隆進(jìn)行測序以確認(rèn)堿基序列錯配/突變情況。結(jié)果顯示10164es發(fā)生堿基錯配/突變的比例優(yōu)于國內(nèi)外品牌試劑。
0210kb以內(nèi)片段擴增延伸時間可達(dá)5 sec/kb
使用10164es和t產(chǎn)品均以5 sec/kb的延伸速度從100 ng人基因組模板擴增不同長度片段（0.4-10 kb），延伸時間均要求為5 sec/kb。結(jié)果顯示，10164es在10kb以內(nèi)的片段均可以5 sec/kb的延伸速度擴增。marker: yeasen 10510es。
03可擴增不同gc含量的基因片段
使用10164es從人gdna模板中擴增23-76% gc含量片段，延伸時間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示，產(chǎn)品擴增特異性良好，能兼容不同gc含量片段擴增。marker: yeasen 10510es。
04可兼容不同類型的模板
使用10164es從不同樣本中擴增不同長度片段，延伸時間設(shè)置5-10 sec/kb。結(jié)果顯示本產(chǎn)品擴增特異性良好，能兼容不同模板的不同片段擴增。
注：1.小鼠gdna 1 kb；2.小鼠gdna 2 kb；3.小鼠gdna 6 kb；4.玉米gdna 1 kb；5.水稻gdna 2 kb-a；6.水稻gdna 2 kb-b；7.人293細(xì)胞cdna 1 kb；8.人293細(xì)胞cdna 2 kb ；9.人293細(xì)胞cdna 3 kb；10.人293細(xì)胞cdna 12 kb；11.大腸桿菌菌液8 kb；12.大腸桿菌菌液16 kb；13.水稻gdna 10 kb-a；14.水稻gdna 10 kb-b；15.水稻gdna 10 kb-c；16.水稻gdna 20 kb-a；17.水稻gdna 20 kb-b；18.人血液直擴3 kb。marker: yeasen 10510es
05不同物種模板擴增檢出率高
用10164es分別對擬南芥、油菜、馬鈴薯0.5-10 kb 不同gc含量的片段進(jìn)行擴增，延伸時間5 sec/kb，結(jié)果顯示10164es可保證擴增。marker: yeasen 10510es。
用10164es分別對擬南芥、油菜、果蠅、秀麗線蟲和斑馬魚中隨機序列(序列隨機拉取)，0.5-10kb覆蓋20-80%gc含量的片段進(jìn)行擴增，延伸時間5 sec/kb，結(jié)果顯示10164es檢出率高。
06穩(wěn)定性好，37℃可放置7天
使用37℃熱加速放置3 d和7 d的10164es分別擴增100 ng人基因組中3 kb和5 kb的dna片段，延伸時間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示產(chǎn)品具有不錯的穩(wěn)定性。marker: yeasen 10510es。
客戶試用反饋01動物gdna-120bp-50%gc
客戶評價：pcr過程速度快，條帶合適，可在瓊脂糖電泳中直接上樣。進(jìn)口n品牌的條帶偏上，可能是自身的buffer影響，且未添加loading buffer，該產(chǎn)品可替代目前我的實驗方案中的高保真酶。
02植物cdna-729bp-45.13%gc
客戶評價：與進(jìn)口t品牌相比，克隆條帶更加清晰單一，整個pcr時間也更快，跑膠時不用再額外加染料，非常方便快捷。
03微生物gdna-1158、1953bp-58.8%、52.9%gc
客戶評價：與國產(chǎn)v品牌相比，效果相當(dāng)，個人感覺更佳。
04植物cdna-2000bp-40%gc
客戶評價：效果很好，條帶清楚。
產(chǎn)品試用通道10163es01-無電泳指示劑
10164es-含電泳指示劑
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